Gidrofobik ustun xromatografiyasi

Gromatografiya xromatografiyasi(HIC) asosan oqsillarning ajralib chiqishi va tozalashda, xususan, gidrofob xususiyatlariga ega bo'lganlar. Ushbu xromatografik usul namunaviy molekulalar va statsionar bosqich o'rtasidagi differrofiy o'zaro ta'sirni o'z ichiga oladi, ularning migratsiya tezligiga asoslangan holda ko'chma fazada nogiron bo'lgan qismlarni ajratishga imkon beradi. Ushbu keng qamrovli maqolada biz printsiplar, foydalanish, arizalar, afzalliklarga, kamchiliklarni va gromatografiya xromatografiyasining so'nggi yutuqlariga amal qilamiz.

Xik asosi statsion fazasiga biriktirilgan protein molekulalari va gidrofobli liganandlar o'rtasidagi gidrofoblik o'zaro ta'sirida yotadi. Tabiatda ampantixiy bo'lgan oqsillar, gidrofil va gidrofilik qoldiqlari ham bor. Suvogilik echimlarda gidrofil qoldiqlar suv molekulalari bilan o'zaro ta'sir qiladi, gidrofob qoldiqlari ko'pincha oqsilning uchinchi darajasida dafn etiladi. Biroq, ba'zi sharoitlarda, masalan, tuz konsentratsiyasi mavjudligi kabi, bu gromatografik matritsalar bilan o'zaro munosabatlarini targ'ib qilish, gromatografiya ligandlari bilan o'zaro munosabatlarini targ'ib qilish mumkin.

Xik-da mobil fazada odatda ths 6-8 bilan buferlangan sho'rlangan eritmadan iborat. Sprofob o'zaro ta'sirini kuchaytirish uchun yuqori tuz konsentratsiyasi ishlov berish bosqichiga oqsillarni bog'lashga yordam beradigan gidrofob shovqinlarni kuchaytiradi. Moliyani tahlil qilish paytida mobil bosqichda tuz konsentratsiyasini bosqichma-bosqich kamaytirish, oqsillarni ularning gidofoblik asosida taniqli bo'lishiga imkon beradigan yuvish quvvatini oshiradi. Ustuvi jihatdan gidrofob ta'siridagi oqsillar birinchidan, keyinchalik o'zaro ta'sirga ega bo'lganlar taniqli.

Gidrofoblar ustuni xromatografiyasining metodologiyasi bir qator muhim qadamlarni, shu jumladan namunani tayyorlash, ustunli tayyorgarlik, namunani, oqlangan va fraktsiyalar to'plami yuklanmoqda.

Nece Namuna tayyorlash:
Namunani ustunga yuklashdan oldin, mobil fazaning tuz konsentratsiyasiga mos keladigan etarli tuzni qo'shish orqali namuna tayyorlash juda muhimdir (muvozanat buferi). Namunaviy eritma pH detnotasi, shuningdek, vakillik shartlarini qondirish uchun sozlanishi kerak.

◆ Ustun muvozanati:
Ustun mobil fazasi bilan tengdir, bu ma'lum bir pH va tuz konsentratsiyasining buferi sho'rlangan eritmasi bo'lgan. Bu statsionar fazasi namuna oqsillari bilan o'zaro ta'sirlashga tayyor bo'lgan bufer bilan to'yinganligini ta'minlaydi.

◆ namunani yuklash:
Tayyorlangan namuna ustunga yuklanadi. Namunaning hajmi komponentlarning kontsentratsiyasi va ommaviy axborot vositalarining majburiy sig'imi ta'sir qiladi. Qayta tiklangan namunalar uchun oldindan belgilanmasdan to'g'ridan-to'g'ri yuklash mumkin.

◆ Muvaffaqiyatsiz:
Mobil fazaning tuz konsentratsiyasini asta-sekin kamaytirish orqali amalga oshiriladi, shu bilan oqsillar va statsionar o'zgarishlar o'rtasidagi gidrofob o'zaro ta'sirini pasaytiradi. Shu bilan bir qatorda, mobil davrni parchani o'zgartirish yoki bog'langan oqsillarni almashtirish uchun mobil holatga organik eritgich yoki yuvish vositalarini qo'shish orqali amalga oshirilishi mumkin.

◆ fraktsiyalar to'plami:
Tuklangan fraktsiyalar maqsadli oqsillarning tozalik va tiklanishini baholash uchun yig'iladi va tahlil qilinadi.

Bir nechta omillar isrof xromatografiyasida ajratish samaradorligi va oqsillarning tozaligi sezilarli darajada ta'sir qiladi:

◆ Tuz konsentratsiyasi va turi:
Mobil bosqichdagi tuzning turi va kontsentratsiyasi gidrofob aloqalarini modulyatsiya qilishda hal qiluvchi rol o'ynaydi. Ammoniy sulfat va natriy xlorid kabi tuzlar odatda 0}} dan Ammoniy sullorid uchun 0}} konsentratsiyalari va natriy xlorid uchun 75 dan 2 ta mol / l.

◆ pH:
Ko'chma fasdagi pH oqsillarning zaryadi va gidrofobligiga ta'sir qiladi. Proteinning imoelektrik nuqtalaridan uzoqda, gidrofob o'zaro ta'sirini kamaytirish orqali ogohlantirishga intiladi.

◆ harorat:
Ustun haroratini oshirish obodonlashtirish samaradorligini oshirishga olib keladi va ajratish samaradorligini oshirishga olib keladi.

◆ oqim stavkasi:
Oqim darajasi statsionar bosqich bilan ta'siriga ta'sir qiluvchi ustundagi oqsillarning yashash vaqtiga ta'sir qiladi.

◆ Ustun xususiyatlari:
Ustunning uzunligi, diametri va qadoqlash materiallari butunlay ajratish samaradorligiga hissa qo'shadi. Statsionar faza materiali va uning sirt xususiyatlarini tanlash juda muhimdir.

HIC turli xil oqsillarni, shu jumladan zardob oqsillari, membranali oqsillar, yadroviy oqsillar, retseptorlar va rekombinant oqsillarni tozalashda keng qo'llaniladi. Uning yumshoq ajralish shartlari, bu fermentlar, antijiliklar va boshqa terapevtik oqsillar kabi faol moddalarni tozalash uchun mos keladi.

Afzalliklari:

1) Yuqori tiklanish narxlari: HIC keng miqyosli tozalash jarayonlari uchun samarali bo'lgan oqsillarning yuqori darajada tiklanish sur'atlarini taklif etadi.

2) Proteinning faoliyatini davom ettirgan: engil ajratish sharoitlari oqsil denaturasi va faoliyatni yo'qotishini kamaytiradi.

3) Ko'p uchlik: HIC turli xil gidrofob xususiyatlari bilan keng doirani tozalash uchun moslashtirilishi mumkin.

Kamchiliklari:

1) Cheklangan eritmalar: Ba'zi oqsillarning pasayishiga qadar tuzlangan eritmalarni, shuningdek, HICda qo'llanilishini cheklashi mumkin.

2) Tuz aralashishi: mobil fazada yuqori tan konsentratsiyasi qo'shimcha ravishda zarur bo'lgan tartib-qoidalarni talab qiladigan keyingi tahliliy qadamlarga xalaqit berishi mumkin.

So'nggi yutuqlar kengayish samaradorligi va barqarorligi bilan yangi xromatografik matrislarni rivojlantirishga qaratilgan. Grofil o'zaro ta'sirni tashkil etish xromatografiya (Hilik) printsiplari va aralash rejimdagi qatnovlardan foydalanish polar birikmalarini ajratish uchun qo'llanilishini kengaytirdi.

Bundan tashqari, ION-birja xromatografiyasi yoki o'lchamlarini istisno qilish naqdligi kabi boshqa xromatografik usullar bilan integratsiyalashuvi yanada samarali va mustahkam tozalash protokollarini rivojlantirishga yordam berdi. Avtomatlashtirish va yuqori darajadagi tekshiruv texnologiyalari, shuningdek, XIka jarayonlarining tarqalishi va tarqalishiga yordam berdi.

Kelgusidagi yo'nalishlar bo'yicha kelgusidagi yo'nalishlar alternativ ligandlar va matrislarni ajratish samaradorligini yanada oshirish va dasturlarning doirasini kengaytirish uchun muqobil liganandlar va matritsalarni qidirishga kiradi. Ekologik toza va barqaror mobil bosqichlarning rivojlanishi, shuningdek oqsil denaturasi minimallashtirish uchun jiddiy sharoitlarni optimallashtirish, davom etayotgan tadqiqotlar sohalarida saqlanib qoladi.

Xulosa qilib aytganda, gromatografiya xromatografiya oqsilografiyani ajratish va tozalash uchun, xususan, gidrofob xususiyatlariga ega bo'lgan ko'p qirrali va samarali vosita. Namunaviy molekulalar va statsionar bosqich o'rtasidagi differentsiyalar bilan farqlashda HIC turli xil terapevtik, diagnostika va ilmiy qo'llanmalar uchun yuqori sifatli oqsillarni tozalash imkonini beradi. Xromatografik materiallar, avtomatika va boshqa usullar bilan davom etayotgan yutuqlar bilan HIC kelajagi, yanada samaradorligi va biofarmatsevtik sohalarda keng qo'llanilishini va'da qiladi.

Issiq teglar: Gidrofobik ustun xromatografiyasi, Xitoy gidrofobeksi xromatografiya ishlab chiqaruvchilar, etkazib beruvchilar, fabrikasi